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熒光的發(fā)光過(guò)程可以分為三個(gè)階段-
熒光顯微鏡廠商
熒光的發(fā)光過(guò)程可以分為三個(gè)階段,可用電子能階簡(jiǎn)圖-Jablonski
diagram 來(lái)作說(shuō)明。第一階段(對(duì)應(yīng)圖上的 1)是在基態(tài) S0 的熒光分子吸收了由激
發(fā)光源提供帶有 hνEX 能量的光子而是分子到達(dá)較高的 excited electronic singlet
state (單重激發(fā)態(tài)) S1 ,其中激發(fā)光選擇的波長(zhǎng)必須要涵蓋熒光分子最大的吸收波長(zhǎng)。
第二階段(對(duì)應(yīng)圖上的 2),躍遷到高能態(tài) S1 的熒光分子會(huì)發(fā)生結(jié)構(gòu)上的變化或是
和週遭環(huán)境產(chǎn)生交互作用,這將造成部分能量損耗而進(jìn)入較低的能態(tài) S1 。這個(gè)
階段是熒光發(fā)生的起源
第三階段(對(duì)應(yīng)圖上的 3)處在 S1 的熒光分子以光的型式釋放能量回到基態(tài) S0 ,
因?yàn)樵诘诙A段有能量損失,所以釋放出來(lái)的光子能量較低且光的波長(zhǎng)較長(zhǎng)。當(dāng)
中激發(fā)光光子與熒光光子的能量差(hνEX –hνEM)稱(chēng)之為 Stokes shift。因此我們
可靠著 Stokes shift 的特性,利用兩種光的不同波長(zhǎng)配合適當(dāng)?shù)臑V片來(lái)分離出需要的熒光訊號(hào)
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